Konvensjonell kolonnekromatografi
2.Kromatografisk kolonne (rotasjonstype)
3. Kromatografisk kolonne (manuell)
*** Prisliste for helhet ovenfor, spør oss for å få
Beskrivelse
Tekniske parametere
Konvensjonell kolonnekromatografiBruker forskjellen i distribusjonsforhold for forskjellige stoffer mellom den stasjonære fasen og den mobile fasen, eller de forskjellige retensjonskapasitetene til faste faser i forhold til forskjellige stoffer, for å oppnå stoffseparasjon. Når blandingen strømmer gjennom den kromatografiske kolonnen med mobilfasen, vil den samhandle med den stasjonære fasen i kolonnen (for eksempel oppløsning, adsorpsjon osv.). På grunn av forskjellene i fysiske og kjemiske egenskaper og strukturer for hver komponent i blandingen, varierer også størrelsen og styrken til deres interaksjoner med den stasjonære fasen. Under samme drivkraft er retensjonstiden for hver komponent i den stasjonære fasen annerledes, slik at komponentene i blandingen strømmer ut av kolonnen i en viss rekkefølge og oppnår separasjon.
Parameter
Deteksjon av plantevernmidler rest
 |
 |
 |
 |
Vi sier ofte detKonvensjonell kolonnekromatografier faktisk kolonnekromatografibilde, også kjent som kolonnekromatografi. Den ble først oppfunnet og brukt av russiske forskere i 1903. Det knuste en løsning av plantepigmenter i kalsiumkarbonatpulver og fant forskjellige fargebånd på kalsiumkarbonatpulveret fra topp til bunn. Ved å skille og trekke ut forskjellige fargebånd, ble relativt ren klorofyll, lutein, etc. oppnådd.
Etter hundre års utvikling har denne metoden blitt relativt moden, og den stasjonære fasen har også utviklet seg fra et enkelt kalsiumkarbonatpulver til aluminiumoksyd (som kan deles inn i sure, nøytral, alkalisk), silikas silika, aktivert karbon, etc. blant dem, er silika -gel og silikasilika i større laboratorier.
Den stasjonære fasen (silikagel) må generelt renses og aktiveres, og partikkelstørrelsen skal være ensartet. I teorien, jo mindre partikkelstørrelse og større overflateareal per enhetsmasse, jo høyere adsorpsjonskapasitet og desto bedre er separasjonseffekten.
Imidlertid, i praktisk bruk, når de faste fasepartiklene er for små, er det ofte to situasjoner: en er at de er lettere i vekt og lett flyter i luften (silikagel kan ikke nedbrytes av menneskekroppen, og jo finere, jo mer giftig er det); For det andre kan små partikler også føre til små hull mellom partikler, noe som resulterer i et langsomt løsningsmiddelstrømningshastighet og tidsforbruk; Når du tar silikon som eksempel, er den største kommersielt brukte størrelsen på silikon for øyeblikket 200-300 nett.
Når det gjelder kolonnens passeringsmetoder, i tillegg til det automatiske analyseutstyret som fremover sirkulasjonsforberedelse, effektiv væskefaseforberedelse og kolonne passeringsmaskiner som er nevnt tidligere, er manuell kolonnepassing hovedsakelig delt inn i tre typer: atmosfæretrykksøylens passering, depressuriseringskolonne passering og trykksøylen passering.
Blant dem resulterer depressuriseringen gjennom kolonnen i dårlig adsorpsjonseffektivitet på grunn av hurtigstrømningshastigheten til elueringsmidlet, noe som fører til tap av det meste av antall brett og dårlig separasjonseffektivitet. Det er egnet for å skille prøver med relativt åpne TLC -plater, spesielt for prøver med bare en stor polar urenhet i produktet; Det meste av tiden blir brukt på forbehandling av forbindelser, og fjerner noen urenheter før nøye rensing. Det skal bemerkes at fordampning av løsningsmiddel forårsaket av negativt trykk under bruk kan føre til kondensering av et stort antall vanndråper på den ytre overflaten av søylen. Vannfølsomme forbindelser skal ikke lett forsøkes.
Atmosfærisk trykksøyle som passerer er den mest effektive separasjonsmetoden blant de tre, men fordi løsningsmidlet ofte beveger seg for sakte, kan selv den beste separasjonseffekten påvirke effektiviteten. Derfor blir det vanligvis brukt trykk på dette tidspunktet, som kalles trykksøyle som passerer; Men trykket skal ikke være for høyt. Generelt brukes en dobbel kjedeball til manuell drift, og en fiskepumpe brukes til automatisk drift. Begge kan endres som vist på bildet.
Konvensjonell kolonneovergangsprosess:
Forberedelsesarbeidet bør gjøres bra:
Når du velger en kolonne, må du observere om det er et slipbrett. Husk å fylle bunnen med litt bomull for kolonner uten slipbrett. Bomullen skal ikke være for tykk eller for tynn, så lenge den kan hindre silikonet fra å komme av. (Bloggeren demonterte direkte en kleshenger og brukte den til å sette inn bomull i stikkontakten på pluggen)
Forbered minimum polaritet elueringsmiddel, UV -lampe (anbefalt for laboratoriepersonell, håndholdt, klar til å ta et bilde når som helst), trykkutstyr og testrørstativ etter behov!
Velg en passende kolonne, tilsett silikongel, suge silikongelen og flat den
Utvalget avKonvensjonell kolonnekromatografier veldig viktig, og størrelsen deres bør beregnes basert på mengden produkt, som generelt kan deles inn i:
Noen få milligram kolonne (det endelige valget for total syntese);
En kolonne med flere titalls milligram (metodologisk ekspansjonssubstrat);
500 milligram til 1 gram kolonne (ved hjelp av metodikk som råstoff);
Søyler rundt 5G og større skalaer.
Det vanligste forholdet mellom kolonnediameter og høyde i laboratoriet er vanligvis mellom 1: 2,5 og 1:15. Mengden silikagel brukt som en stasjonær fase under prøvelastning er omtrent 20 til 40 ganger den for prøven. Standarden for valg av kolonner skal være basert på TLC -plateklatringssituasjonen til prøven din. Hvis det er mange urenheter i nærheten, kan du prøve å velge en større kolonne så mye som mulig, slik at prøven din kan dekkes med et lite tynt lag (anbefalt tykkelse under 5mm). Hvis urenhetene er langt borte, kan denne tykkelsen naturlig økes, men det anbefales ikke at tykkelsen på prøven din overstiger 2 cm, med mindre produktet ganske enkelt blir vasket.
Mange mennesker gjør en feil ved å tro at å legge til mer silikon, selv om det er tykkere på prøven min, kan det skilles godt? Dette svaret er negativt!
Årsaken er at disse menneskene aldri trodde at prøvene under og over ikke kjørte på samme linje, slik at de bare kunne skaffe noen rene, hvorav de fleste ble krysset, for ikke å nevne uren, kaste bort tid og løsningsmidler!
Det er også grunnen til at prøven krever tynning!
Etter å ha valgt kolonnen, kan tilsetning av silikon gjøres gjennom en fôringstrakt. Sørg for å bruke en maske og operere i en avtrekk. Årsaken til dette vil ikke bli utdypet av bloggeren (silikose).
Når det gjelder infiltrasjon av silikagel, er den anbefalte prosessen: Først, plasser silikagel -kolonnen med silikagelen installert vertikalt, flat overflaten på silikagelen med hånden, koble bunnen av silikagel -søylen til en vannpumpe, pump ut silikagelen, og hell deretter i den minst polar eluenten fra over. Når eluenten er i ferd med å lekke ut, lukker du avstengningsventilen for å forhindre at løsningsmiddel blir pumpet inn i vannpumpen.
Deretter, under trykk, kan silikongelen bli ensartet gjennomvåt ved å skylle syv eller åtte kolonnevolum med den minste mengden utviklingsmiddel.
Prøve ovenfor
Prøvetaking er delt inn i våt prøvetaking og tørr prøvetaking.
(1) Våt prøvetaking.
Den anbefalte metoden er å bruke en pipette med en gummispiss for å suge prøven, nær den øverste delen av silikongelen, dryppe sakte og jevnt dryppet prøven til den dekker et lag, så stopp til å legge prøven og bruke litt trykk for å fordype det fete stoffet i silikongelaget; Fordyp det fete stoffet i silikonlaget og gjenta denne prosessen flere ganger til alle prøver er lastet!
Noen nye studenter kan være nysgjerrige på hvorfor denne operasjonen utføres i stedet for å belegge den våte prosessoljen som stoff på en gang?
Faktisk kan denne operasjonen redusere den effektive høyden på prøvelaget. På dette tidspunktet har kolonnekromatografi allerede begynt, og de påfølgende prøvene er som løsningsmidler som skyver de tidligere prøvene til adsorber og desorberer i silikagel.
(2) Når det gjelder tørr prøvetaking.
Med mindre absolutt nødvendig, anbefales det ikke. Faste prøver anbefales mer å bli slått eller krystallisert. Uscruklusous Methods, Ethylacetat vs. vann, ultralydsvingning assistert krystallisering av høy kokende olje "og" Deling av en laboratoriekrystalliseringsmetode "anbefales.
Tørr prøvetaking gir vanligvis to problemer; På den ene siden, under prøveblandingsprosessen, øker muligheten for reaksjon mellom prøven og silikagel på grunn av behovet for å øke temperaturen for rotasjonsfordamping; På den annen side betyr tørrbelastning at adsorbenter vil bli introdusert i prøvelaget, noe som øker høyden på prøvelaget eller størrelsen på kolonnen, og krever mer tid og mer løsningsmiddel.
Hvis det ikke er noe annet valg, bare hell det adsorberte pulveret sakte i kolonnen for lasting, med noen krav som ligner på våte metoder.
Tilsett vannfri natriumsulfat eller kvartssand
For å unngå å påvirke prøvelaget under tilsetning av elueringsmiddel, forårsake ujevnhet, deformasjon og påvirke separasjonseffektiviteten, legges et lag med vannfri natriumsulfat eller kvartssand vanligvis på toppen av prøvelaget.
Ingeniørene våre foretrekker personlig å legge vannfri natriumsulfat fordi den også har en tørkefunksjon og er vennlig mot løsningsmidler som diklormetan, som er utsatt for flyktning, varmeabsorpsjon og kondensasjon!
Gradienteluering, prøvetaking og samling
Etter lasting, skyll først kolonnen med et lite polært løsningsmiddel (et løsningsmiddel som ikke lar produktet passere gjennom) for 2-3 kolonnevolum (ett kolonnevolum er definert som volumet på den mobile fasen som strømmer inn og ut) for å sikre ensartet, og deretter velge en andel for eluering.
Hvordan velge elueringsmiddel som passerer gjennom kolonnen?
Forholdet mellom elueringsmiddel er forholdet når produktet når en RF -verdi på omtrent 0. 2 på TLC -platen
Dette er opplevelsen av kolonnevask som jeg har lest mange bøker og delt, og den faktiske prosessen er også veldig lik. Personlig foretrekker jeg å redusere gradienten med to ganger.
For eksempel, hvis løsningsmidlet for TLC -plateklatring er PE/EA =2: 1, er det mer sannsynlig at bloggeren starter gradienteluering fra PE/Ea =4: 1 og slutter ved PE/Ea =2: 1, generelt resulterer i bedre resultater.
Det er også teknikker når du samler inn elueringsmiddel. Du kan først velge et større testrør for å motta det, og når TLC nærmer seg målpunktet, kan du bytte til et mindre testrør. Dette kan redusere muligheten for å motta mer og unngå urenheter.
Hvis du møter situasjoner der urenhetspunkter og produktpunkter er tett sammen, spesielt de med svak fluorescens, husk ikke å bruke press. I stedet velger du å passere kolonnen under normalt trykk, og endre røret hver gang halv eller mindre rør er koblet sammen, noe som også kan øke rensesannsynligheten.
Husk å ikke håndtere søylen på en riktig måte!
Mange mennesker har en vane å anta at kolonnen er passert og tørket når det ikke er noe produkt i ett eller to rør etter TLC i det senere stadiet.
Jeg innså bare at utbyttet var for lavt da jeg beregnet det, eller da jeg gikk for å lage et spekter, fant jeg ut at spekteret var feil og savnet feil poeng. Jeg angret på det dypt.
Så det anbefales at du ikke skynder deg å behandle kolonnen etter å ha fullført ønsket punkt. Utfør i stedet kjernefysisk magnetisk resonans for å matche utbyttet før prosessering.
Hvis du har det travelt eller har det travelt med å rense andre forbindelser med detteKonvensjonell kolonnekromatografi, anbefales det å skylle med et høyt polaritets godartet blandet løsningsmiddel og la denne delen av elueringsmiddelet separat for identifikasjonsresultater.
Populære tags: Konvensjonell kolonnekromatografi, Kina Konvensjonell kolonnekromatografiprodusenter, leverandører, fabrikk
Et par
Liten kromatografikolonneSende bookingforespørsel
